Úsek pro vědu a výzkum

Oddělení HLA analýzy

Genotypizaci HLA systému provádí oddělení HLA analýzy od roku 1993 jako první v České republice a to pro potřeby pacientů ÚHKT, Kliniky dětské hematologie a onkologie FN Motol a dalších klinických zadavatelů.

Tato poskytovaná vyšetření jsou od roku 2002 akreditována u Českého institutu pro akreditaci o.p.s. (ČIA) dle norem dle ISO/IEC 17025 a v roce 2004 získala laboratoř jako první v ČR akreditaci i podle ISO 15189 určené speciálně pro zdravotnické laboratoře. Kontinuální udržování zavedeného systému kvality, každoroční účast v externích prověrkách kvality i systém interních kontrol, umožňuje zpětnou vazbu o kvalitě a úrovni poskytovaných služeb a jejich další zlepšování.

Laboratoř je akreditována v rámci NRL pro DNA diagnostiku u Českého institutu pro akreditaci a také je držitelem certifikátu European Federation for Immunogenetics (Certifikát).

Stanovení genotypu HLA systému - hlavního histokompatibilního systému člověka

HLA systém (Human Leukocyte System) je hlavní histokompatibilitní systém člověka. Geneticky se mapuje na krátké raménko 6. chromosomu (do polohy 6p21.31. - 6p21.33). Produkty jeho enormně polymorfních genů (jedná se o řádově stovky alel, ale konečné počty nebyly dosud stanoveny) jsou antigenní struktury (transmembránové glykoproteiny), které rozpoznávají organismu cizí struktury a tím zahajují kaskádu imunitních odpovědí.

Určení přesného genotypu HLA u pacienta a jeho dárce je jednou ze základních podmínek pro úspěšnost allogenní transplantace hematopoetických kmenových buněk. Neshoda v HLA oblasti mezi dárcem a příjemcem transplantátu může navodit odhojení tohoto štěpu, popřípadě způsobit nemoc štěpu proti hostiteli GvHD (Graft Versus Host Disease), která je vážnou, popřípadě fatální komplikací.

Je známa také asociace některých onemocnění (např. revmatoidní artritida, coeliakia, narkolepsie, inzulin dependentní diabetes melitus) s konkrétními alelami HLA systému, což se projevuje zvýšením relativního rizika vzniku choroby při přítomnosti dané alely. Žádná z těchto asociací však není absolutní.

Studium HLA systému začíná být i důležitým nástrojem farmakogenetiky, kdy HLA znak může predikovat odpovídavost/neodpovídavost či senzitivitu pacienta na podání léčebného preparátu (např. podání Abacaviru u HIV pozitivních pacientů).

V současné době provádíme rutinně genotypizaci nejdůležitějších transplantačních lokusů HLA I. a II. třídy: HLA -A, -B, -C, -DRB1, -DQB1 u pacientů indikovaných k  allogenní transplantaci hematopoetických kmenových buněk a jako konfirmační vyšetření pro ně vybraných nepříbuzných dárců z českých i zahraničních registrů. Po dohodě provádíme i genotypizaci vybraných lokusů HLA systému jako doplňující informaci pro stanovení diagnózy některých s HLA asociovaných chorob.

Pro genotypizaci používáme řadu přesných metodik:

  • polymerázovou řetězovou reakci se sekvenčně specifickým primery (PCR-SSP) - metoda akreditovaná ČIA o.p.s. v Praze (obr. 1)
  • přímé sekvenování (SBT) - metoda akreditovaná ČIA o.p.s. v Praze (obr. 2)
  • nepřímý dot blot (alternativně užívaná metoda)

Vyhodnocení výsledků je prováděno speciálními softwary, které jsou navázány na mezinárodní databázi HLA alel a jsou v závislosti na této databázi pravidelně aktualizovány. Tím je zajištěna maximální vypovídací schopnost vydávaných výsledků.

Další aktivity oddělení

Laboratoř stanovuje HLA znaky asociované s chorobami:

Pro uvedené HLA znaky laboratoř pořádá pro zájemce každoroční programy MPZ.