DNA PCR test firmy GENTECH

Princip metody:

Princip metody: Set HPV DNA PCR vyráběný firmou Gentech je určený pro detekci nízko, či vysoko-rizikových typů lidských papillomavirů (HPV) ve stěrech z hrdla děložního. Test detekuje 5 LR (HPV 6, 11, 42, 43, 44) a 7 HR HPV typů (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 45, 56). Test je založen na amplifikaci virové DNA polymerázovou řetězovou reakcí pomocí primerů specifických k 5 LR HPV nebo k 7 HR HPV, výsledkem reakce je u pozitivního vzorku viditelný proužek DNA odpovídající velikosti kontrolní pozitivní DNA (pro LR HPV 747 pb, pro HR HPV 692 pb) na elektroforéze. Součástí testu je i soubor reagencií pro izolaci DNA.

Obr.: Elektroforéza

Detekce velmi-rizikových typů HPV:

• jamka 1. marker pUC18/MspI
• jamka 2. negativní kontrola amplifikace
• jamka 3. pozitivní kontrola amplifikace
• jamka 4. vzorek č. 1, výsledek Hybrid Capture II (HCII) negativní
• jamka 5. vzorek č. 2, výsledek HCII HR 26,51
• jamka 6. vzorek č. 3, výsledek HCII negativní
• jamka 7. vzorek č. 4, výsledek HCII HR 2135,78
• jamka 8. vzorek č. 5, výsledek HCII negativní
• jamka 9. vzorek č. 6, výsledek HCII HR 63,64
• jamka 10. vzorek č. 7, výsledek HCII HR 260,84
• jamka 11. vzorek č. 8, výsledek HCII HR 1,93
• jamka 12. vzorek č. 9, výsledek HCII negativní
• jamka 13. vzorek č. 10, výsledek HCII HR 2,52
• jamka 14. kontrola izolace
• jamka 15. HPV16
• jamka 16. HPV18
• jamka 17. marker pUC18/MspI
• jamka 18. HPV31
• jamka 19. HPV33
• jamka 20. HPV35
• jamka 21. HPV45
• jamky 22.-26. ředění SIHA buněk
• jamka 27. HPV56
• jamky 28.-30. nízko-rizikové klony (30-HPV42, 32-HPV43)

Hodnocení NRL:

Test firmy Gentech je ve srovnání s Hybrid CaptureII i PCR MY 09/11 méně citlivý. Limitní množství pro detekci u ředící řady SIHA buněk je 1 000 kopií HPV 16 pro kit pro detekci velmi-rizikových typů HPV, u kitu pro detekci málo-rizikových typů HPV je nízká citlivost pro testovaný typ HPV 43 (typ problémový z EHK). Výrazným nedostatkem je falešně pozitivní výsledek na HR HPV pro HPV 42 a 43, ze skupiny LR HPV. Z HPV typů, které firma neuvádí, že by měl test detekovat, jsme testovali HPV 52, který je pomocí kitu pro detekci velmi-rizikových typů HPV amplifikován, což však není chybou, ale výrobce by měl testovat set i na další, byť nezařazené typy a o případné skřížené reaktivitě informovat zákazníka. V současné podobě lze jen těžko doporučit tento set pro využití v rutinní praxi v ČR.