DNA PCR test firmy GENTECH

Princip metody:

Princip metody: Set HPV DNA PCR vyráběný firmou Gentech je určený pro detekci nízko, či vysoko-rizikových typů lidských papillomavirů (HPV) ve stěrech z hrdla děložního. Test detekuje 5 LR (HPV 6, 11, 42, 43, 44) a 7 HR HPV typů (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 45, 56). Test je založen na amplifikaci virové DNA polymerázovou řetězovou reakcí pomocí primerů specifických k 5 LR HPV nebo k 7 HR HPV, výsledkem reakce je u pozitivního vzorku viditelný proužek DNA odpovídající velikosti kontrolní pozitivní DNA (pro LR HPV 747 pb, pro HR HPV 692 pb) na elektroforéze. Součástí testu je i soubor reagencií pro izolaci DNA.

Obr.: Elektroforéza

Detekce velmi-rizikových typů HPV:

jamka 1. marker pUC18/MspI
jamka 2. negativní kontrola amplifikace
jamka 3. pozitivní kontrola amplifikace
jamka 4. vzorek č. 1, výsledek Hybrid Capture II (HCII) negativní
jamka 5. vzorek č. 2, výsledek HCII HR 26,51
jamka 6. vzorek č. 3, výsledek HCII negativní
jamka 7. vzorek č. 4, výsledek HCII HR 2135,78
jamka 8. vzorek č. 5, výsledek HCII negativní
jamka 9. vzorek č. 6, výsledek HCII HR 63,64
jamka 10. vzorek č. 7, výsledek HCII HR 260,84
jamka 11. vzorek č. 8, výsledek HCII HR 1,93
jamka 12. vzorek č. 9, výsledek HCII negativní
jamka 13. vzorek č. 10, výsledek HCII HR 2,52
jamka 14. kontrola izolace
jamka 15. HPV16
jamka 16. HPV18
jamka 17. marker pUC18/MspI
jamka 18. HPV31
jamka 19. HPV33
jamka 20. HPV35
jamka 21. HPV45
jamky 22.-26. ředění SIHA buněk
jamka 27. HPV56
jamky 28.-30. nízko-rizikové klony (30-HPV42, 32-HPV43)

Hodnocení NRL:

Test firmy Gentech je ve srovnání s Hybrid CaptureII i PCR MY 09/11 méně citlivý. Limitní množství pro detekci u ředící řady SIHA buněk je 1 000 kopií HPV 16 pro kit pro detekci velmi-rizikových typů HPV, u kitu pro detekci málo-rizikových typů HPV je nízká citlivost pro testovaný typ HPV 43 (typ problémový z EHK). Výrazným nedostatkem je falešně pozitivní výsledek na HR HPV pro HPV 42 a 43, ze skupiny LR HPV. Z HPV typů, které firma neuvádí, že by měl test detekovat, jsme testovali HPV 52, který je pomocí kitu pro detekci velmi-rizikových typů HPV amplifikován, což však není chybou, ale výrobce by měl testovat set i na další, byť nezařazené typy a o případné skřížené reaktivitě informovat zákazníka. V současné podobě lze jen těžko doporučit tento set pro využití v rutinní praxi v ČR.